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關(guān)鍵詞:Tris緩沖液 配置方法 應(yīng)用
Tris中文品名為三羥甲基氨基甲烷; 氨基丁三醇;緩血酸胺;2-氨基-2-(羥甲基)-1,3-丙二醇。是一種白色結(jié)晶或粉末。溶于乙醇和水,微溶于乙酸乙酯、苯,不溶于乙醚、slht,對銅、鋁有腐蝕作用,有刺激性的化學(xué)物質(zhì)。
Tris有很高的緩沖能力,在水中溶解度高,對很多酶反應(yīng)是惰性的,使Tris成為用于許多生化目的非常滿意的緩沖液。一般用于穩(wěn)定反應(yīng)體系的pH,在pH7.5-9.0之間有較強(qiáng)的緩沖能力。
Tris緩沖液的優(yōu)點(diǎn):
① 因為Tris堿的堿性較強(qiáng),所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;
② 對生物化學(xué)過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。
Tris緩沖液的缺點(diǎn):
① 緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1;
② 溫度效應(yīng)大,溫度變化對緩沖液pH值的影響很大,△pKa/℃=-0.031,例如:4℃時緩沖液的pH=8.4,則37℃時的pH=7.4,所以一定要在使用溫度下進(jìn)行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃;
③ 易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴(yán)密封;
④ 此緩沖液對某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用,所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。
Tris緩沖液配置方法:
配制Tris-HCl緩沖液的方法有兩種:分別配制0.05 mol/L Tris和0.05 mol/L HCl溶液,然后按常用表中所列體積混合即可。但是由于標(biāo)準(zhǔn)濃度的稀鹽酸不易配制,所以常用另一種方法:以配置1 L 0.1 mol/L的Tris-HCl緩沖液為例:先稱12.11 g Tris堿溶于950 mL~970 mL 去離子水中,邊攪拌邊滴加4 N HCl,用pH計測定溶液pH值至所需的pH值,然后再加水補(bǔ)足到1 L。
Tris緩沖液pH范圍:
Tris緩沖液在生物化學(xué)研究中使用較廣泛的一種緩沖劑,它的常用有效pH范圍是在“中性”范圍,如:
Tris-HCl緩沖液:pH=7.5~8.5
Tris-磷酸鹽緩沖液:pH=5.0~9.0
Tris緩沖溶液的應(yīng)用:
在電泳緩沖液中同甘氨酸構(gòu)成緩沖體系穩(wěn)定pH值;在凝膠中使用Tris-HCl緩沖體系穩(wěn)定pH值;被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑;Tris緩沖液的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)還可用于線蟲的中間纖維的形成;在Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”,可用于Dna的穩(wěn)定和存儲;將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成乙酸,獲得“TAE緩沖液”,換成硼酸可獲得TBE緩沖液。這兩種緩沖液常用于核酸電泳實驗中。