固定 具有凝固或沉淀組織蛋白的作用,因此能抑制酵解酶類的活動(dòng)和xj的繁殖,從而呈現(xiàn)對組織的固定作用 (1)10%福爾馬林液:1份甲醛液 + 9份蒸餾水市場上出售的甲醛液約含37-40%的甲醛,10%福爾馬林液實(shí)際上僅含3.7-4.0%的甲醛 適用范圍:各種組織。但是經(jīng)10%福爾馬林液固定的組織,細(xì)胞核染色較好,而細(xì)胞質(zhì)染色較差 處理:組織塊一般固定24h以上,長時(shí)間亦可,甚至可用來長期保存組織塊。短時(shí)間固定的組織塊不需水洗,可直接轉(zhuǎn)入70%酒精脫水 (2)Bouin氏液: 苦味酸飽和水溶液(1.22%) 75ml 甲醛液 25ml 冰醋酸 5ml 適用范圍:各種動(dòng)物組織及植物組織的根尖,是動(dòng)物組織良好的固定液 處理:固定24h,也可在此液長期保存。流水沖洗或不經(jīng)水洗直接入70%酒精脫水。
脫水
?、僖陨细骷壱掖济撍畷r(shí)間可根據(jù)組織塊的大小適當(dāng)調(diào)整。對于小的組織塊(如胃黏膜、支氣管粘膜等)可適當(dāng)減少脫水時(shí)間,對于較大的組織塊可適當(dāng)增加脫水時(shí)間,但各級乙醇最長不要超過12h,無水乙醇不要超過4h。如中途因故不能繼續(xù)進(jìn)行下去,則可將標(biāo)本退回至80%乙醇中保存。另外,脂肪組織和疏松結(jié)締組織一般應(yīng)延長脫水時(shí)間,在95%乙醇中水分必須脫凈,脂肪必須溶解掉(50%以上濃度的乙醇可溶解脂肪和類脂質(zhì))。否則,石蠟不能滲入脂肪細(xì)胞和纖維組織,無法切出好的切片,而且染色時(shí)也易脫片。
?、谌艚M織含水分過多(如胚胎組織),則脫水劑濃度應(yīng)由更低級乙醇(如30-40%乙醇)開始,這對保證制片質(zhì)量十分重要。
③若脫水不盡,切片后蠟塊切面組織常出現(xiàn)凹陷(因蠟塊中bao埋的組織與空氣接觸后即干燥收縮)。這樣的蠟塊,雖能勉強(qiáng)切出切片,但染色效果極差,染色時(shí)組織也容易脫落。因此,脫水必須徹底,脫水徹底與否是制片質(zhì)量好壞的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。
?、苊撍畡┑娜莘e應(yīng)為組織塊總體積的5-10倍,脫水劑應(yīng)及時(shí)過濾,更換。
透明(56-60度恒溫箱) 為了使石蠟浸入到組織塊內(nèi),必須經(jīng)過一種既能與脫水劑混合,又能與石蠟相溶的媒介物質(zhì),這個(gè)過程稱透明。 目前{zh0}的透明劑是二甲苯,在常溫下,如果不是時(shí)間過長(超過24小時(shí)以上)二甲苯并不會(huì)引起組織過份發(fā)脆,相反會(huì)使某些組織結(jié)構(gòu)比較質(zhì)韌的組織:比如子宮肌瘤等相當(dāng)好切),但是當(dāng)二甲苯溫度超過40℃以后,極易引起組織發(fā)脆。 5、透蠟(56-60度恒溫箱中) (4-5步驟)80%酒精(≤1h)→→95%酒精(≈1h)→→{bfb}酒精(1)(2)(45-100min)→→1/2二甲苯+1/2酒精(30min)→→二甲苯(35min+30min)→→1/2二甲苯+1/2蠟(45min)→→蠟(1)(2)(1-2h) 6、bao埋