1 范圍
本規(guī)范規(guī)定了測(cè)定化妝品中雌三醇等7 種性js的{gx}液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器
法、{gx}液相色譜-紫外檢測(cè)器/熒光檢測(cè)器法和氣相色譜/質(zhì)譜鑒定法。
本規(guī)范適用于化妝品中雌三醇等7 種性js的檢測(cè)和鑒定。
{dy}法 {gx}液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器法
2 方法提要
以有機(jī)溶劑提取化妝品中的性js，用{gx}液相色譜儀進(jìn)行分析，以保留時(shí)間和紫外
吸收光譜圖或熒光光譜圖定性，以峰面積進(jìn)行定量。各js的檢出限及取1g 樣品時(shí)的檢出
濃度見(jiàn)表1。
表1 各js的檢出限和檢出濃度
js組分 雌三醇 雌酮 己烯雌酚雌二醇睪丸酮甲基睪丸酮 黃體酮
檢出限，μg 0.02 0.04 0.01 0.02 0.002 0.002 0.003
檢出濃度，μg/g 40 80 20 40 4 4 6
3 試劑
本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑除另有說(shuō)明外，均為優(yōu)級(jí)純?cè)噭?br /> 3.1 甲醇。
3.2 飽和氯化鈉溶液。
3.3 環(huán)己烷。
3.4 硫酸 [?（H2SO4）＝2％]：取硫酸（ρ20＝1.84g/mL）2mL，緩慢加入到98mL 水中，
混勻。
3.5 js標(biāo)準(zhǔn)溶液
3.5.1 雌js標(biāo)準(zhǔn)溶液[ρ（雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚）＝2g/L]：分別稱(chēng)取雌酮、
雌二醇、雌三醇、己烯雌酚各0.200g，用少量甲醇（3.1）溶解，移至100mL 容量瓶中，用
甲醇稀釋到刻度。
3.5.2 雄js標(biāo)準(zhǔn)溶液[ρ（睪丸酮、甲基睪丸酮）＝600mg/L]：分別稱(chēng)取睪丸酮、甲基睪丸
酮各0.600g，用少量甲醇（3.1）溶解，轉(zhuǎn)移至100mL 容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度。1mL
此溶液含以上兩種雄js6.00mg。移取此標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇
（3.1）稀釋到刻度。
3.5.3 孕js標(biāo)準(zhǔn)溶液[ρ（黃體酮）＝600mg/L]：稱(chēng)取黃體酮0.600g，用少量甲醇（3.1）
溶解，轉(zhuǎn)移至100mL 容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度。1mL 此溶液含孕js6.00mg。移取此
標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇（3.1）稀釋到刻度。
221
3.5.4 混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：分別移取雌js標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.5.1）50.0mL，雄js標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.5.2）
5.00mL 和孕js標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.5.3）5.00mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇（3.1）稀釋到刻
度。1mL 此溶液分別含4 種雌js各1.00mg、2 種雄js各30.0μg 和1 種孕js30.0μg。
4 儀器
4.1 {gx}液相色譜儀，具等容泵、二極管陣列檢測(cè)器或熒光檢測(cè)器。
4.2 離心機(jī)。
4.3 具塞比色管，10mL。
5 分析步驟
5.1 樣品預(yù)處理
5.1.1 溶液狀樣品：準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品1g～2g 于10mL 具塞比色管中，在水浴上餾除乙醇等揮
發(fā)性有機(jī)溶劑，用甲醇（3.1）稀釋到10mL，備用。
5.1.2 膏狀、乳狀樣品：準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品1g～2g 于100mL 錐形瓶中，加入飽和氯化鈉溶液（3.2）
50mL，硫酸（3.4）2mL，振蕩溶解后轉(zhuǎn)移至100mL 分液漏斗。以環(huán)己烷（3.3）30mL 分三
次萃取，必要時(shí)離心分離。合并環(huán)己烷并在水浴上餾除。用甲醇（3.1）溶解殘留物，轉(zhuǎn)移
到10mL 具塞比色管中，用甲醇稀釋到刻度。混勻后，經(jīng)0.45μm 濾膜過(guò)濾，濾液備用。
5.2 色譜參考條件
色譜柱：C18 柱，250×4.6mm，10μm；
檢測(cè)波長(zhǎng)：二極管陣列檢測(cè)器（cxjs－204nm，xxjs－245nm）或熒光檢測(cè)器
（激發(fā)波長(zhǎng)280nm，發(fā)射波長(zhǎng)310nm）；
流動(dòng)相：甲醇+水=60+40；
流速：1.3mL/min；
5.3 校準(zhǔn)曲線的制備
移取js標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（3.5.4）0.00、1.00、2.00、5.00mL 置于10mL 具塞比色管中，
用甲醇（3.1）稀釋到刻度。調(diào)節(jié)儀器到{zj0}狀態(tài)，取樣5μL 注入{gx}液相色譜儀，以標(biāo)準(zhǔn)
品的峰面積繪制校準(zhǔn)曲線。
5.4 測(cè)定
取待測(cè)溶液5μL 注入{gx}液相色譜儀，根據(jù)峰的保留時(shí)間和紫外吸收光譜圖或熒光光
譜圖定性，根據(jù)峰面積從曲線上查出待測(cè)溶液中js的質(zhì)量濃度。
6 計(jì)算
ρ×V
ω（js）=
m
式中：ω（js）——樣品中js的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，μg/g；
ρ——從曲線上查出測(cè)試溶液中js的質(zhì)量濃度，mg/L；
V——樣品定容體積，mL；
m——樣品取樣量，g。
222
7 色譜圖
第二法 {gx}液相色譜-紫外檢測(cè)器法/熒光檢測(cè)器法
8 方法提要
以有機(jī)溶劑提取化妝品中的性js，用{gx}液相色譜儀進(jìn)行分析，以保留時(shí)間定性，
峰面積定量。各js的檢出限及取1g 樣品時(shí)的檢出濃度見(jiàn)表2。
表2 各js的檢出限和檢出濃度
js組分 雌三醇 雌酮 己烯雌酚雌二醇睪丸酮甲基睪丸酮 黃體酮
檢出限，μg 0.05 0.4 0.03 0.035 0.002 0.002 0.004
檢出濃度，μg/g 100 800 60 70 4 4 8
9 試劑
同{dy}法。
圖2 xxjs的色譜圖
圖1 cxjs的色譜圖
223
10 儀器
10.1 {gx}液相色譜儀：具等容泵、紫外檢測(cè)器或熒光檢測(cè)器。
10.2 離心機(jī)。
10.3 具塞比色管，10mL。
11 分析步驟
11.1 樣品預(yù)處理
同{dy}法。
11.2 色譜參考條件
色譜柱：C18 柱，250mm×4.6mm，10μm；
檢測(cè)波長(zhǎng)：紫外檢測(cè)器（檢測(cè)波長(zhǎng)254nm）或熒光檢測(cè)器（激發(fā)波長(zhǎng)280nm，發(fā)射波
長(zhǎng)310nm）；
流動(dòng)相：甲醇+水=80+20；
柱溫：45℃；
流速：0.6mL/min。
11.3 校準(zhǔn)曲線的制備
移取0、1.0、2.0、5.0mL js標(biāo)準(zhǔn)使用液（3.5.4）置于10mL 具塞試管中，用甲醇（3.1）
稀釋到刻度。調(diào)節(jié)儀器到{zj0}狀態(tài)，取樣5μL 注入{gx}液相色譜儀，以標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積繪
制校準(zhǔn)曲線。
11.4 測(cè)定
取待測(cè)溶液5μL 注入{gx}液相色譜儀，根據(jù)峰的保留時(shí)間定性，根據(jù)峰面積從曲線上
查出待測(cè)溶液中js的質(zhì)量濃度。
12 計(jì)算
同{dy}法。
13 色譜圖
圖 3 性js的色譜圖
1：雌三醇(2.68min)； 2：雌酮(3.62min)； 3：己烯雌酚(4.22min)； 4：雌二醇(4.81min)；
5：睪丸酮(5.58min)； 6：甲基睪丸酮(6.54min)； 7：黃體酮(9.74min